主要用途

組織沉默調節蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過比色探針對硝基苯胺標記人工合成的乙酰化p53多肽底物，經過SIRT1脫乙酰基后，被位點特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對硝基苯胺，即采用比色法來測定組織裂解萃取樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品（動物、人體）、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

人體組蛋白脫乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細胞核中；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細胞核和細胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結構域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙酰基反應，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團轉化產生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細胞核內，與酵母Sir2同源性高。其功能在于調節p53活性和抑制細胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位點）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用比色染料對硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）來標記乙酰化p53多肽底物，其次進行脫乙酰化，后底物進一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強烈吸光值的黃色對硝基苯胺（波長405nm），由此來定量測定沉默調節蛋白1的活性。

用戶自備

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：用于清洗組織樣品
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
（微型）臺式離心機：用于組織細胞預處理
培養箱：用于反應物孵育
96孔板或100微升1厘米光徑比色皿：用于反應和比色的容器
酶標儀或分光光度儀：用于比色分析

注意事項

1．本產品為20次操作，包括背景對照
2．操作時，須戴手套
3．系統操作過程中，背景測定只需1次
4．樣品須澄清，至關重要 
5．樣品處理時，避免使用蛋白酶抑制劑、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等
6．孵育反應完成后即刻進行比色測定
7．濾波器可以使用波長400nm替代405nm
8．測定值由低到高變化；酶動法測定可以持續60分鐘
9．測定值吸光讀數越高，表明酶活性越高
10．比色測定后，比色皿須清洗*
11．待測樣本為核蛋白樣品，其蛋白濃度為50微克/20微升；待測樣本為組織裂解懸液，其蛋白濃度為200微克/20微升（本公司提供  Bradford蛋白質濃度定量試劑盒30030.1） 
12．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
13．沉默調節蛋白1單位活性定義為：在30℃，pH 8.0條件下，每分鐘內能夠釋放1微摩爾對硝基苯酚所需的酶量作為一個活性單位
14．本公司提供系列組蛋白脫乙酰基酶檢測試劑產品

質量標準

1．本產品經鑒定性能穩定
2．本產品經鑒定檢測敏感