石蠟切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒產品說明書

主要用途

石蠟切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑是一種旨在使用標準化的化學脫蠟方法和偉郝夫（Verhoeff）蘇木素以及三色染料（trichrome），分析和區分存檔中的石蠟包埋組織切片中的彈性纖維的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心改良傳統方法、成功實驗證明的。廣泛用于結締組織、肌肉組織和纖維蛋白的研究等。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

彈性纖維（elastic fiber），又稱為黃色纖維（yellow fiber），是固有結締組織（Connective tissue proper）細胞外基質的成分之一，由平滑肌細胞和成纖維細胞產生彈力蛋白質（elastin）、原纖維蛋白（fibrillin；FBN）等構成。彈性纖維具有可伸展性。存在于皮膚、肺、動脈、靜脈、彈力軟骨、牙周韌帶（periodontal ligament）、脂肪組織中。彈性纖維缺失導致皮膚松弛癥（cutis laxa）、威廉姆斯綜合征（Williams Syndrome）等疾病。基于摩羅利 （mallory）應用三色系統的方法，馬森（masson）進行了改良，在三色復合染料體系中，使用苯胺籃（aniline blue）替代綠籃。同時使用偉郝夫（Verhoeff）蘇木素選擇性染色彈性纖維，三色復合染料幫助區別其它包括肌肉、膠原纖維、纖維蛋白（fibrin）等組織成分。馬森方法操作復雜，可以細致區分多種組織成分。  

產品內容

脫蠟液（Reagent A）         300毫升

脫水液A（Reagent B）  100毫升

脫水液B（Reagent C）  100毫升

脫水液C（Reagent D）  100毫升

脫水液D（Reagent E）  100毫升

清理液（Reagent F）  200毫升

韋格液（Reagent G）  100毫升

祛色液（Reagent H）   20毫升

岑克液（Reagent I）  100毫升

范氏液（Reagent J）   10毫升

比氏液（Reagent K）   10毫升

酸性液（Reagent L）   10毫升

染色液（Reagent M）   10毫升

修正液（Reagent N）   10毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意安全；有效保證6月

用戶自備

小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器

培養箱或烘箱：用于樣品反應孵育

微波爐：用于樣品反應孵育處理

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

• 脫蠟處理

• 取出10片待測的5微米厚的石蠟包埋的組織切片 
• 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的脫水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

• 樣本染色處理

操作一：標準染色

• 小心加入1毫升韋格液（Reagent G）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 放進60℃恒溫培養箱孵育60分鐘 
• 小心移去韋格液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升祛色液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去祛色液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入1毫升岑克液（Reagent I）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 放進60℃恒溫培養箱孵育60分鐘 
• 小心移去岑克液（Reagent I）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升范氏液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘 
• 小心移去范氏液（Reagent J）  
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升祛色液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去祛色液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升比氏液（Reagent K）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去比氏液（Reagent K）
• 小心加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 重復實驗步驟29至30二次
• 小心加入200微升酸性液（Reagent L）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：可以孵育15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去切片上的酸性液（Reagent L）
• 小心加上200微升 染色液（Reagent M）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘，避免光照（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去切片上的染色液（Reagent M）
• 小心加上200微升 修正液（Reagent N）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心移去切片上的修正液（Reagent N）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫水液B（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：如果比氏液（Reagent I）染色過深，建議使用由此步驟開始的選擇步驟，并快速操作）
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫水液B（Reagent C）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫水液A（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫水液A（Reagent B）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：

彈性纖維――呈現黑色

細胞核――呈現黑色

細胞質――呈現紅色

肌纖維――呈現紅色

角蛋白――呈現紅色

膠原纖維――呈現藍色

操作二：熱處理染色

• 準備3個50毫升燒杯或小型染色缸，分別加入50毫升清理液（Reagent F）、韋格液（Reagent G）和岑克液（Reagent I）
• 小心放進上述脫臘處理的切片到50毫升韋格液（Reagent G）小型染色缸里
• 放進微波爐（600瓦）加熱45秒
• 小心移去切片上的韋格液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升祛色液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去祛色液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心將切片置入50毫升岑克液（Reagent I）小型染色缸里
• 放進微波爐（600瓦）加熱60秒
• 小心移去岑克液（Reagent I）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升范氏液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘 
• 小心移去范氏液（Reagent J）  
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升祛色液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去祛色液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加入200微升比氏液（Reagent K）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去比氏液（Reagent K）
• 小心加入200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 重復實驗步驟30至31二次
• 小心加入200微升酸性液（Reagent L）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去切片上的酸性液（Reagent L）
• 小心加上200微升 染色液（Reagent M）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘，避免光照（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果）
• 小心移去切片上的染色液（Reagent M）
• 小心加上200微升 修正液（Reagent N）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心移去切片上的修正液（Reagent N）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫水液B（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：如果比氏液（Reagent I）染色過深，建議使用由此步驟開始的選擇步驟，并快速操作）
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫水液B（Reagent C）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫水液A（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫水液A（Reagent B）
• （選擇步驟）小心加上200微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• （選擇步驟）小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：

彈性纖維――呈現黑色

細胞核――呈現黑色

細胞質――呈現紅色

肌纖維――呈現紅色

角蛋白――呈現紅色

膠原纖維――呈現藍色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全 
• 建議使用玻璃染色缸
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態下進行
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列特定組織染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰