主要用途
冰凍切片組織堿性磷酸酶活性染色試劑是一種旨在使用偶聯(lián)偶氮技術(shù),在底物存在的情況下,分析組織樣本中堿性磷酸酶表達,而呈現(xiàn)亮紅色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于動物組織冰凍切片,同時也適合原生代或培養(yǎng)細胞的酶活性檢測。尤其可用于骨組織病理生理的研究和干細胞分化能力的鑒定。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,靈敏牢固,顯色清晰。
技術(shù)背景 堿性磷酸酶(ALKALINE PHOSPHATASE)在堿性環(huán)境下催化各種醇和酚的磷酸酯水解,存在于活躍運輸?shù)哪ど希缑氀芗懊氀艿膭用}部分的內(nèi)皮,腎近曲小管壁邊緣和小腸上皮的紋狀緣,胎盤組織,未分化的干細胞等表達含量為豐富。它與骨質(zhì)的形成,維持細胞內(nèi)磷酸酶的濃度,以及與經(jīng)膜吸收和轉(zhuǎn)運過程有關(guān)。偶聯(lián)偶氮技術(shù)的基本原理為堿性磷酸酶水解底物(磷酸萘酯)釋放出萘酚,立即為重氮鹽所捕獲而成為不溶性有色的偶氮染料。實驗初(1944)應(yīng)用β-萘磷酸鹽作為底物,釋放出的萘酚與重氮α-萘胺偶聯(lián),在酶的活動處形成有色沉淀。Burstone (1962)推薦使用替代萘酚,如萘酚AS-MX磷酸鹽。重氮鹽有很多種,但較適宜的有Fast blue RR,F(xiàn)ast red TR,F(xiàn)ast violet B,F(xiàn)ast blue VRT 和Fast black B。偶聯(lián)偶氮技術(shù)孵育時間短;穩(wěn)定,靈敏;在正常組織中因無萘酚,故不需要對照;反應(yīng)產(chǎn)物為偶氮染料難以溶解,不易彌散因而圖象清晰。 |