主要用途

 細胞CDK2/CYCLIN A激酶活性熒光共振能量轉移法（FRET）定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針EDANS供體和DABCYL受體雙重標記的多肽底物，在CDK2/CYCLIN E抑制劑的存在下，受到CDK2/CYCLIN A的磷酸化后，不能被位點特異性氨基肽酶切離，而發生熒光峰值的降低，即采用熒光共振能量轉移法來測定樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或*純化酶樣品中CDK2/CYCLIN A激酶的特異活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，安全可靠。

技術背景

細胞周期素依賴性激酶2（cyclin dependent kinase 2；CDK2；EC 2.7.11.22），又稱為細胞分裂周期蛋白1（cell division cycle1；CDC1）或p33，屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家屬成員之一。其與酵母細胞的cdc28和cdc2高度進化保留。細胞周期素依賴性激酶2的催化亞體，與細胞周期素E然后A結合，允許細胞由G1期進入DNA合成期，達到調節細胞生長、DNA復制、細胞分裂等。p21Cip1 （CDKN1A）and p27Kip1 （CDKN1B）是CDK2激酶的抑制劑。CDK2/CYCLIN A激酶的磷酸化目標序列為HHASPRK。基于磷酸化多肽具有抗氨基肽酶切離的功能，通過熒光共振能量轉移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即傳遞激發狀態的能量由處于較短波長的供體（donor）到覆蓋供體波長的受體（acceptor），使得距離依賴性反應的供體的散發光子淬滅（quench），使用2個熒光探針EDANS供體和DABCYL受體作為FRET對，來標記的CDK2多肽底物的兩端，在氨基肽酶（aminopeptidase）的作用下，釋放出強烈熒光的EDANS；一旦在CDK2/CYCLIN E抑制劑二氨基吡唑-1氫4-基偶氮酚【4-（3,5-diamiH-pyrazol-4-ylazo）-phenol】的存在下，底物受到CDK2/CYCLIN A的磷酸化（由ATP的γ-磷酸根到多肽上單一絲氨酸殘基分子上），底物將不能被位點特異性氨基肽酶切離，而無法釋放出EDANS，由此根據產物熒光強度（激發波長340nm，散發波長490nm）的降低，來定量測定細胞周期素依賴性激酶2/細胞周期素A的特異活性。CDK2/CYCLIN A反應系統為：