目的：研究使用此試劑本試劑盒測定大鼠血清，血漿， 基質金屬蛋白酶2（MMP-2）含量的上清液樣品。 實驗原理： 大鼠基質金屬蛋白酶檢測樣品，本試劑盒的雙抗體夾心法（MMP-2）水平的2。與純 大鼠基質金屬蛋白酶2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，單克隆抗體的多孔涂層 基質金屬蛋白酶2（MMP-2），然后加入MMP-2抗體、HRP標記的抗體結合，形成 抗體復合物酶與底物TMB顯色，*清洗后。TMB HRP催化酶轉化 在酸的作用下進入決賽的黃色?；|金屬蛋白酶的顏色深度和樣品中的2（MMP 正相關。測得的吸光度在450nm波長與ELISA（OD值），通過標準曲線計算樣品 基質金屬蛋白酶2（MMP-2）濃度。 試劑盒組成： 試劑盒組成48孔配置96孔配置保 說明書1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1個1個 酶標包被板1×481×962-8℃保 標準品：450μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保 標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保 酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保 樣本處理及要求： 1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收 清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。 2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后， 20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該 離心。 3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存 中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-30 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液， 濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備 用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器 將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待 檢測，其余冷凍備用。 6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟： 1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標 準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二 孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各 取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混 勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準 品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl， 濃度分別為300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。 2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣 品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣 品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混 勻。 3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 7.溫育：操作同3。 8.洗滌：操作同5。 9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘. 10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止 液后15分鐘以內進行。 注意事項： 1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值 大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計 算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用。 10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 計算： 標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪制標準曲線，根據OD樣品 從標準曲線查出相應的濃度值乘以稀釋； 多；或與標準濃度與標準計算 標準曲線的線性回歸方程，樣本的OD值 方程，計算樣品濃度，再乘以稀釋 多，為樣品的實際濃度 （此圖僅供參考） 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。 2.批內與批見應分別小于9%和11% 檢測范圍： 20μg/L-400μg/L 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月 |
ELISA（酶免）試劑盒
人ELISA試劑盒
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