*培養(yǎng)基以及基礎(chǔ)培養(yǎng)基的用途 |
點擊次數(shù):1473 更新時間:2013-11-18 |
用以培養(yǎng)細胞的*培養(yǎng)基是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如MEM)和添加劑(如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子)而組成。期間雖然培養(yǎng)基的配方一直在改進(這也包括抗生素和抗有絲分裂劑等等),但是基礎(chǔ)培養(yǎng)基的在培養(yǎng)基配方中依舊占據(jù)著為重要的地位。
絕大多數(shù)的培養(yǎng)基都是建立在平衡鹽溶液(BSS)的基礎(chǔ)上的,再往其中添加氨基酸、維生素以及其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì),這樣就形成了初步也是基礎(chǔ)的培養(yǎng)基。我們熟知的也是被廣泛應用的培養(yǎng)基“Eearle`s MEM ”的混合物,其中就包含了13種必須氨基酸和8種維生素。而次于MEM的Ham`s F12 也包含了許多非必須氨基酸,含有的維生素的范圍亦是很廣闊,另外也含有常規(guī)無機鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。
MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,就會形成神經(jīng)生物學中通用的培養(yǎng)基“Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM”,這種培養(yǎng)基現(xiàn)應用于快速生長的細胞,雖同MEM含有的營養(yǎng)成分相同,但其濃度高出2~4倍,令人驚訝。選擇某種培養(yǎng)基,應當經(jīng)過仔細考慮,首先應細致的了解培養(yǎng)基成分表,其次我們應知道在大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都是有不足的。
例如,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸,這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學領(lǐng)域,但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言是具有危害的,所以并非是佳選擇,特別體現(xiàn)在如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中的時候。值得注意的F12中是含有硫酸亞鐵,據(jù)報道稱也是有神經(jīng)毒效應,要注意使用。
在所有這些培養(yǎng)基中,一般情況下谷氨酸是比其他氨基酸有更高的濃度的,這是由于它具有不穩(wěn)定性以及它在許多細胞培養(yǎng)中會常用作碳源。另外對于神經(jīng)元的培養(yǎng)我們會常常在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中會增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(注:若培養(yǎng)基中這兩種物質(zhì)缺乏時)。對于MEM與F12要注意的是二者均是要用5%的CO2來平衡的,其中DMEM含更高濃度的NaCO3,所以要用10%的CO2來平衡,當然也可以在較低CO2濃度下使用,但效果差一些。不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細胞系生長的研究之上的,但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有出人意料的的結(jié)果,令人滿意 。 |
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