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人S-100ELISA試劑盒 說明書

    檢測范圍:78 pg/mL -5000 pg/mL;實驗原理:本產品運用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中S-100水平的技術。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入S-100抗原、生物素化的抗人S-100抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉變成藍色，并在酸的作用下終轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的S-100呈正比。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。預期應用:ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養物上清或其它相關液體中S-100含量。

人S-100ELISA試劑盒的組成以及試劑配制方法：

1.酶聯板:一塊（96孔）

2.標準品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋到1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復搖晃以助溶解，其濃度為5000 pg/mL，做系列倍比稀釋后，分別稀釋成5000 pg/mL，2500 pg/mL，1250 pg/mL，625 pg/mL，312.5 pg/mL，156 pg/mL，78 pg/mL其原液直接當作高標準濃度，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/mL，要臨用前15分鐘內配制。如配制2500 pg/mL標準品：取0.5ml 5000 pg/mL的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3.樣品稀釋液:1×20ml/瓶。

4.檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。

5.檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。

6.檢測溶液A:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。

7.檢測溶液B:1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8.底物溶液:1×10ml/瓶。

9.濃洗滌液:1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.終止液:1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

標本的采集及保存：

1.細胞培養物上清：請離心后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。

2.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過液后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟：

各試劑在使用前平衡到室內溫度。

1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，輕輕混和均勻，酶標板加上蓋，在37℃下反應120分鐘。

2.棄倒掉液體，甩干，不用洗滌。

3.每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘,洗板3次，350ul/每孔，甩干。

4.每孔加檢測溶液B工作液（100ul），37℃,60分鐘,洗板5次，甩干。

5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘（此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯）。

6.依序每孔加終止溶液50ul，終止反應（此時蘭色立轉黃色）。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

注：

1.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不填加任何試劑，只是后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

2.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內。

洗板方法:

1.手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。

2.自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算:以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

特異性:本試劑盒可同時檢測重組或天然的人S-100，且與其它相關蛋白沒有交叉反應。

注意事項：

1.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

2.一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

3.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。

4.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

5.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

6.底物須避光保存。

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說明:

1.剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少量水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。

2.濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3.中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。

4.保存條件:-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。

5.人S-100ELISA試劑盒有效時間:6個月