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菜鳥做ELISA試劑盒實驗的一些心得體會
點擊次數：4097 更新時間：2013-08-06
 
菜鳥ELISA試劑盒實驗之標本搜集
 
        這個很要害呀！標本搜集及保管的好壞，直接決議了試驗能否成功。在搜集標本之前有必要考慮到試驗對標本搜集及保管的需求，這些需求對標本中待測物質穩定性影響很大。以ELISA為例。ELISA檢測的通常是液態標本，應在搜集到新鮮標本后當即離心留取上清液1ml左右移入高溫滅菌過的1.5ml EP管中。這種標本在4度保管48小時，-20度保管1個月，-80度保管6個月對檢測影響不大。
 
        樣本通常都是怕重復凍融的，這樣會使蛋白降解，如需做預試驗或需重復取用標本時，應在搜集時即分裝幾個EP管（管外注意用標號筆標記好，否則就會牛頭不對馬嘴了！）。不注意這些需求，即便試驗做的再美麗也是瞎的，不大會出成果。 
 
菜鳥ELISA試劑盒實驗之實驗前的準備以及開始實驗
 
       .試驗前的預備工作那是適當的重要。要用到的100ul中槍頭、1000ul大槍頭、1.5ml EP管事前滅菌好是有必要的；屢次運用的酶標板框洗凈烘干。
 
        100ul加樣槍及槍頭，1000ul加樣槍及槍頭，100ml量筒（洗凈并雙蒸水沖刷），500ml量杯（洗凈并雙蒸水沖刷，試驗室沒有更小的了），雙蒸水100ml（稀釋洗滌液用），吹氣球，吸水紙（定性濾紙），試管架，避光濕盒，酶標板框，定時器，膠帶，剪刀，棄物盒及廢液缸。
 
        預備試驗時進入試驗室即翻開37度恒溫箱讓它開端升溫，否則比及需求用時再翻開，你急它不急，它升溫需求時刻，能夠現已過了要溫育的時刻它才到達37度；樣品和試劑盒在室溫下平衡30分鐘以上。
 
        ELISA試劑盒固化的抗體在底部，加樣時槍頭千萬不要碰究竟部；用不完整個試劑盒能夠分隔用，但分時必定不要摸底部，緣由同前。試驗前佳自個寫一個操作進程，把操作中注意事項寫明白。不要只看著試劑盒闡明書做，由于闡明書是把操作程序和注意事項分隔寫了，看不過來，別的闡明書上許多東西究竟寫的不具體，網上的經歷參閱也要寫在操作進程里，越具體越好； 
 
        通常一批標本只會運用有些試劑和微孔板，事前計算好需求的試劑量，分別用1ml注射器抽取比需求量多做3-5個標本的試劑轉移到標記好的1.5mlEP管中，注意1ml注射器不要混用，做到一劑一個注射器。別的顯色液B要避光，轉移時關燈，放的EP管用黑紙包住； 
 
        加樣槍的運用：運用前調整加樣槍加樣量（如我的ELISA試劑盒通常是50ul），吸試劑時按到有阻力感就行了，若是按究竟，加樣量必定超越槍上標明的量了；打出試劑時按到有阻力感后持續下按究竟以便排盡槍頭中的試劑；加顯色劑B時要關燈而且敏捷，加好后用避光袋包住或放在避光濕盒中再孵育；加樣時盡量防止發生氣泡，如有氣泡成生，可用吹氣球吹破之； 
 
        每次孵育時用膠帶封住酶標板口，防止水份蒸騰。微孔板通常是一排8個，在其一端排頭的邊際用記號筆標記下次序（如1，2，3...），防止手藝洗板進程中板朝下拍時不小心致微孔板掉出酶標板框而無法承認次序。
 
         加標準品和樣品時每次都要替換一個槍頭，防止重復運用槍頭而穿插污染； 37度溫育后千萬不要忘掉倒掉微孔板中的液體（包括未結合上的酶聯親和物，其殘留必定形成假陽性），而且要重復用稀釋好的洗滌劑洗板；洗板能夠多洗幾回，沒壞處；
 
        洗板可用50ml或20ml注射器針管+1ml注射器針頭抽洗滌液直接往微孔中沖刷，注意針頭安牢，否則壓力大時把針頭沖到微孔里劃到孔底，很多洗滌劑沖入就不好玩了。 應做預試驗和規范曲線，若是大都樣本測值在高OD值處動搖，要稀釋后再重做，然后按稀釋倍數算出來終成果，因為試劑盒是有測驗規模的。