HL10067.2 v.A

 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑是一種旨在通過(guò)硝基藍(lán)四氮唑染料， 受到超氧 陰離子O2- 的還原， 產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑色色素沉淀，來(lái)定性檢測(cè)冰凍切片組織細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的生 成和增加的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。可以被用于細(xì)胞 凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌， 即到即用，操作簡(jiǎn)捷， 性能穩(wěn)定，顯色 清晰。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基   （hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷   氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等   細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多， 將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭  （tetrazolium）化合物，包括硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)  （3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O2- 的直接還原， 便產(chǎn)生不溶性甲暨色素。據(jù)此證明組織細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的存在。

產(chǎn)品內(nèi)容

 清理液（Reagent A）

 染色液（Reagent B）

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

保存方式

毫升

毫升

1 份

保存  染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保 證 6 月

用戶自備

細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于組織細(xì)胞染色孵育

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

1 ． 準(zhǔn)備 5 片待測(cè)的厚為 10 微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片

2 ． 置于室溫下，小心加上 xx 微升預(yù)冷的  清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面 3 ． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

4 ． 小心加上 xx 微升室溫預(yù)熱的  染色液（Reagent B），鋪滿整個(gè)切片表面 5 ． 在 37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里，孵育 60 分鐘（注意： 避免液體蒸發(fā)）

6 ． 小心移去切片上的  染色液（Reagent B），避免光照

7 ． 小心加上 xx 微升  清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面

8 ． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

9 ． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 7 和 8 二次

10 ．放上蓋玻片或封片

11 ．即刻置于光學(xué)顯微鏡下觀察：組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)黑色，顯示超氧陰離子濃度增強(qiáng)

注意事項(xiàng)

1 ． 本產(chǎn)品為 50 次操作

2 ． 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后 1 小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片

3 ． 操作時(shí)，須戴手套

4 ． 孵育時(shí)，須避免光照

5 ． 組織染色前后的清洗過(guò)程中，小心操作，以免將組織沖洗掉

6 ． 如果超氧陰離子活性氧濃度過(guò)低，可以延長(zhǎng)孵育時(shí)間至 4 小時(shí)

7 ． 建議切片染色完成后，即刻進(jìn)行組織細(xì)胞觀察分析

8 ． 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1 ． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定