特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒

產品說明書

主要用途

特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理，進而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇反應，形成復合體，并產生藍色熒光，分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測。廣泛用于組織病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，熒光清晰。

技術背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構體的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于S. FILIPINENSIS細菌的培養液中。其分子式為C35H58O11，分子量為654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結合形成聚集體或復合物，產生熒光。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以保護組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關鍵。

產品內容

脫蠟液（Reagent A）                 20毫升

凈化液（Reagent B）             5毫升

清理液（Reagent C）            20毫升

水解液（Reagent D）             4毫升

抗干擾液（Reagent E）            4毫升

染色液（Reagent F）             2毫升

產品說明書                1份

保存方式

保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實驗步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進80℃烘箱，孵育30分鐘

3． 取出組織切片

4． 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：使用前，搖勻脫蠟液）

5． 放進70℃恒溫培養箱里孵育5分鐘

6． 即刻小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）

7． （選擇步驟）重復實驗步驟2至4一次

8． 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

9． 室溫下孵育2分鐘

10． 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）

11． 進一步依次常規凈化處理：用戶自備的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇

12． 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

13． 室溫下孵育3分鐘

14． 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

三、樣本染色處理

1． 小心加入200微升水解液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面

2． 室溫下孵育1小時（注意：可以延長至4小時，避免干枯）

3． 小心移去水解液（Reagent D）

4． 小心加入200微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面

5． 小心移去清理液（Reagent C）

6． 重復實驗步驟4至5一次

7． 小心加上200微升抗干擾液（Reagent E），鋪滿整個切片樣品表面

8． 室溫下孵育10分鐘

9． 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent E）

10． 小心加上100微升染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面

11． 室溫下孵育30分鐘，避免光照

12． 小心移去切片上的染色液（Reagent F）

13． 小心加上200微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面

14． 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

15． 重復實驗步驟13至14二次

16． 即刻放上蓋玻片或封片

17． 在熒光顯微鏡下觀察：激發波長：340nm；散發波長：430nm――膽固醇陽性呈現藍色熒光

注意事項

1． 本產品為20次操作

2． 操作時，須戴手套

3． 建議用戶避免使用常規石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

4． 操作時，避免污染母液

5． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2

7． 樣品染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察 

8． 本公司提供系列組織細胞膽固醇染色試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定熒光清晰