冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒產品說明書

主要用途

冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑是一種旨在使用標準化脂溶性偶氮染料蘇丹黑B技術，分析組織樣品中早期脂褐素沉積現象，從而在光學顯微鏡下觀察到黑色表達的組織細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老組織細胞的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于人體或動物組織冰凍切片的的早期脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）"色素，是一種細胞內與年齡相關的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質，成為細胞衰老中后期的獨立指征。蘇丹黑B（SUDAN BLACK B），又稱為二氫二基偶氮萘偶氮嵌間二氮雜苯（2,3-dihydro-2,2-dimethyl-6-（4-phynylazo）-1-naphthyl）azo）1H-perimidine），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。脂褐素分為早期和晚期，早期脂褐素的脂質特性與脂溶性蘇丹黑B染料發生反應，顯示黑色。同時使紅細胞呈現黑色。

產品內容

清理液（Reagent A）              毫升

固著液（Reagent B）          毫升

染色液（Reagent C）          毫升

澄清液（Reagent D）          毫升

產品說明書               1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent C）和澄清液（Reagent D）避免光照，瓶蓋密閉；有效保證6月

用戶自備

小型染色缸：用于切片組織細胞染色操作

光學顯微鏡：用于觀察染色后的組織細胞

實驗步驟

1． 取出待測的10微米厚冰凍組織切片（注意：使用快速冷凍snap－frozen制片，避免包埋處理）  

2． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個樣品表面

3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升固著液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個樣品表面

5． 在室溫下孵育15分鐘

6． 小心移去切片上的固著液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面

8． 在室溫下孵育5分鐘

9． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

10． 小心將切片置入xx毫升染色液（Reagent C）的小型染色缸里（注意：確保切片浸泡在染色液（Reagent C））

11． 室溫下孵育16小時，避免光照，密閉瓶蓋

12． 取出切片，小心移去切片上的染色液（Reagent C）

13． 室溫下，小心將切片置入新的xx毫升澄清液（Reagent D）中5次（2秒/次）（注意：直至切片顏色呈現灰色）

14． 輕輕移去切片上的澄清液（Reagent D），或空氣中晾干 

15． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）

16． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

17． 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）

18． 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：脂褐素陽性組織細胞呈現黑色，紅細胞呈現黑色，背景呈現不同程度灰色

注意事項

1． 本產品為50次操作

2． 操作時，須戴手套

3． 本產品不適合于含有紅細胞的樣本

4． 使用時，避免污染母液

5． 染色液（Reagent C）避免光照

6． 染色時，染色缸須密閉，至關重要

7． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

8． 染色后澄清不宜過度，否則容易褪色

9． 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定著色清晰 

使用承諾

公司秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。