特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒

產品說明書

主要用途

特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理，進

而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇反應，形成復合體，并產生藍色

熒光，分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明

的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測。廣泛用于組織病理生理的研究。產品嚴

格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，熒光清晰。 技術背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）

的多環化合物（polycyclic compound）。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結

合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細胞膜中。在膜功能和脂代謝

以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構體的多烯抗生素（polyene

antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于 S. FILIPINENSIS 細菌的培養液中。其分子式

為 C35H58O11，分子量為 654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結合形成聚集體或復合物，產生熒光。由于

石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此

使用非二甲苯類脫蠟，以保護組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關鍵。 產品內容

脫蠟液（Reagent A） 20 毫升

凈化液（Reagent B） 5 毫升

清理液（Reagent C） 20 毫升

水解液（Reagent D） 4 毫升

抗干擾液（Reagent E） 4 毫升

染色液（Reagent F） 2 毫升

產品說明書 1 份

保存方式

保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；

有效保證 6 月

用戶自備

熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實驗步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出待測的 6 微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進 80℃烘箱，孵育 30 分鐘

3． 取出組織切片

4． 小心加上 500 微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：使用前，搖勻脫蠟

液）

5． 放進 70℃恒溫培養箱里孵育 5 分鐘

6． 即刻小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）

7． （選擇步驟）重復實驗步驟 2 至 4 一次

8． 小心加上 200 微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

9． 室溫下孵育 2 分鐘

10．小心移去切片上的凈化液（Reagent B）

11．進一步依次常規凈化處理：用戶自備的 100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇

12．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

13．室溫下孵育 3 分鐘

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

三、樣本染色處理

1． 小心加入 200 微升水解液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面

2． 室溫下孵育 1 小時（注意：可以延長至 4 小時，避免干枯）

3． 小心移去水解液（Reagent D）

4． 小心加入 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面

5． 小心移去清理液（Reagent C）

6． 重復實驗步驟 4 至 5 一次

7． 小心加上 200 微升抗干擾液（Reagent E），鋪滿整個切片樣品表面

8． 室溫下孵育 10 分鐘

9． 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent E）

10．小心加上 100 微升染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面

11．室溫下孵育 30 分鐘，避免光照

12．小心移去切片上的染色液（Reagent F）

13．小心加上 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

15．重復實驗步驟 13 至 14 二次

16．即刻放上蓋玻片或封片

17．在熒光顯微鏡下觀察：激發波長：340nm；散發波長：430nm――膽固醇陽性呈現藍色熒光

注意事項

1． 本產品為 20 次操作

2． 操作時，須戴手套

3． 建議用戶避免使用常規石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

2

3

4． 操作時，避免污染母液

5． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2

7． 樣品染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察

8． 本公司提供系列組織細胞膽固醇染色試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定熒光清晰