細菌核糖體(ribosome)分離試劑盒說明書 |
點擊次數(shù):795 更新時間:2022-12-13 |
細菌核糖體(ribosome)分離試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細菌核糖體(ribosome)分離試劑是一種旨在通過化學(xué)破膜以及差速超速離心處理方法,分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種培養(yǎng)或臨床細菌菌株核糖體成分的分離。產(chǎn)品即到即用,操作簡易,性能穩(wěn)定,無核酶和蛋白酶污染,萃取純度和產(chǎn)量皆高。
技術(shù)背景
核糖體(ribosome)是一種細小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物(ribonucleoprotein complex),生命細胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置(translational apparatus),由RNA和蛋白質(zhì)組成,具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性,刺激RNA合成,并調(diào)節(jié)RNA、核糖體自身以及蛋白質(zhì)的生物合成。其分成2個亞體:大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運核糖體(tRNA),而小亞體結(jié)合信使RNA(mRNA),然后閱讀RNA提供的信息,轉(zhuǎn)譯(translation)成氨基酸,連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿(游離核糖體)、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體,由40S小亞體和60S大亞體組成:60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成;而40S由18S RNA和33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似,為70S核糖體,由30S小亞體和50S大亞體組成:50S包括5S、23S RNA和34個蛋白;30S包括16S RNA和21個蛋白。細菌核糖體成為抗菌藥物的靶標,其中50%以上抗菌素針對細菌核糖體。同時核糖體高度進化保留,成為種系分類(phylogenetic classification)的分子標志。
產(chǎn)品內(nèi)容
裂解液(Reagent A) 毫升 保存液(Reagent B) 毫升 產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
50毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器 1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器 臺式離心機:用于樣品操作 超速離心機:用于樣品操作 超聲儀:用于裂解細胞 渦旋震蕩儀:用于混勻
實驗步驟
實驗開始前,將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。
1. 準備50毫升細菌(OD600=0.2或108細胞/毫升) 2. 轉(zhuǎn)移到50毫升錐形離心管 3. 放進臺式離心機離心30分鐘,速度為3000g 4. 小心抽去上清液 5. 加入預(yù)冷的xx毫升裂解液(Reagent A) 6. 渦旋震蕩15秒,充分混勻 7. 超聲處理100瓦功率,20秒一次重復(fù)4次 8. 置于冰槽里孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒 9. 放進4℃臺式離心機離心15分鐘,速度為15000g 10. 小心移取上清液到新的高速離心管 11. 放進超速離心機離心15分鐘,速度為30000g 12. 小心移取上清液到新的高速離心管(注意:可以使用礦物油填滿離心管) 13. 放進4℃超速離心機離心2小時,速度為100000g 14. 小心取出離心管 15. 小心抽去上清液 16. 加入500微升或xx毫升保存液(Reagent B),混勻顆粒群 17. 轉(zhuǎn)移到新的1.5毫升離心管 18. (選擇步驟)進行核糖體定量測定 19. 放進-70℃冰箱里保存或置于冰槽里準備后續(xù)操作
注意事項
1. 本產(chǎn)品為20次操作(5 X 109細胞/次) 2. 建議使用足夠的細菌量 3. 樣品操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進行 4. 操作時,須無菌操作,避免污染母液 5. 核糖體定量計算公式(微克/微升): A260 ? 11.1 6. 如果進行核糖體蛋白萃取,建議使用純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒—HL16041 7. 本公司提供系列核糖體分析技術(shù)產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的核糖體維持正常活性 3. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶 |
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