體液糖胺多糖(GAG)總含量二甲基亞甲基藍比色法定量檢測試劑盒 | ||||||||||||||||||||||||
點擊次數:1698 更新時間:2022-12-09 | ||||||||||||||||||||||||
19239.4 v.A
體液糖胺多糖(GAG)總含量二甲基亞甲基藍(DMMB)比色法定量檢測 試劑盒產品說明書
主要用途
體液糖胺多糖(GAG)總含量二甲基亞甲基藍(DMMB)比色法定量檢測試劑是一種旨在通過高鹽萃取可溶性糖胺多糖,與二甲基亞甲基藍染料結合,在丙醇解離溶液中,釋放紫紅色染料,由分光光度儀比色分析,定量檢測組織樣品中糖胺多糖含量的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種人體或動物體液(例如腦脊液、關節滑液、尿液等),以及細胞培養液的糖胺多糖水平檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,檢測準確。
技術背景
糖胺多糖(glycosaminoglycan;GAG),又稱為粘多糖(mucopolysaccharide),是體內最為豐富的異源多聚糖。糖胺多糖是一種未分叉的負電荷性長鏈多聚糖,由重復的二糖單位,包括六碳糖(hexose)或己糖醛酸(hexuronic acid),鏈接到己糖胺(hexoamine)上而成。糖胺多糖與核心蛋白(core protein)共價相聯,構成蛋白多糖(proteoglycan;PG),成為細胞膜和細胞外基質(extracellular matrix;ECM)的主要成分。蛋白多糖的糖胺多糖在合成過程中發生硫酸酯化(sulfated group),其部位在O或N位上,有利于發揮各種不同的作用,包括酶的調節、細胞黏附、生長、遷移、分化,以及組織損傷反應。基于糖胺多糖的高度負電荷的特點,使用異染性(metachromatic)陽離子藍色染料二甲基亞甲基藍(1,9-dimethylmethylene blue;DMMB),在酸性條件下,特異性的結合產生不溶性紫色或粉紅色糖胺多糖染料復合物(Dye-GAG complex),在丙醇解離溶液中,釋放出染料,通過分光光度儀(656nm波長)測定,來定量分析糖胺多糖的總含量。
產品內容
清理液(Reagent A) 1毫升 萃取液(Reagent B) 1毫升 染色液(Reagent C) 25毫升 解離液(Reagent D) 25毫升 標準液(Reagent E) 100微升 產品說明書 1份
保存方式
保存萃取液(Reagent B)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器 15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器 恒溫水槽或干式恒溫儀:用于樣品反應 微型臺式離心機:用于樣品操作 比色皿或96孔板:用于比色分析的容器 分光光度儀或酶標儀:用于比色分析
實驗步驟
一、樣品預處理
1. 準備好1.5毫升離心管 2. 移取1毫升液體(尿液/腦脊液/唾液/精液/關節液/培養液樣品)到離心管 3. 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘,速度為700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415) 4. 小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管 5. 加入50微升萃取液(Reagent B) 6. 強力渦旋震蕩1分鐘,充分混勻 7. 放進56℃恒溫水槽孵育16小時 8. 放進90℃恒溫水槽孵育10分鐘 9. 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415) 10. 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管 11. 置于冰槽里備用
二、標準樣品配制
1. 準備好5個1.5毫升離心管,標記為1至5號管 2. 分別加入50微升清理液(Reagent A)到1至5號管 3. 移取50微升標準液(Reagent E)到1號管,混勻 4. 小心移取50微升1號管稀釋的標準液(Reagent E)到2號管,混勻 5. 小心移取50微升2號管稀釋的標準液(Reagent E)到3號管,混勻 6. 小心移取50微升3號管稀釋的標準液(Reagent E)到4號管,混勻 7. 將1至5號管放進冰槽里備用;標準管濃度見下表
三、 標準曲線測定
1. 移取50微升上述配制的標準液(Reagent E)到1.5毫升離心管 2. 加入1毫升染色液(Reagent C) 3. 渦旋震蕩15秒 4. 室溫下孵育30分鐘,避免光照,期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒 5. 即刻放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g 6. 小心抽去上清液(注意:確保沒有水滴殘留)(注意:可見紫色或粉紅色沉淀) 7. 加入1毫升解離液(Reagent D) 8. 渦旋震蕩15秒 9. 室溫下孵育5分鐘,避免光照(注意:確保充分溶解) 10. 轉移到新的比色皿 11. 即刻放進分光光度儀檢測(波長656nm):獲得標準樣品吸光讀數 12. 重復實驗步驟1至11四次 13. 構建標準曲線:縱座標(Y軸)為吸光讀數;橫座標(X軸)為標準糖胺多糖含量(微克)
四、 樣品測定
1. 加入50微升上述制備的待測樣品到1.5毫升離心管 2. 加入1毫升染色液(Reagent C) 3. 渦旋震蕩15秒 4. 室溫下孵育30分鐘,避免光照,期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒 5. 即刻放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g 6. 小心抽去上清液(注意:確保沒有水滴殘留)(注意:可見紫色或粉紅色沉淀) 7. 加入1毫升解離液(Reagent D) 8. 渦旋震蕩15秒 9. 室溫下孵育5分鐘,避免光照(注意:確保充分溶解) 10. 轉移到新的比色皿 11. 即刻放進分光光度儀檢測(波長656nm):獲得樣品吸光讀數 12. 根據上述標準曲線獲得樣品對應糖胺多糖含量(微克)
五、 濃度計算
根據上述標準曲線樣品對應糖胺多糖含量(微克)÷0.050(樣品容量;毫升)=微克糖胺多糖/毫升
注意事項
1. 本產品為25次操作,包括標準樣品 2. 本產品不適合于非硫酸酯化的二糖降解片段、透明質酸(hyaluronate)的檢測 3. 本產品可以檢測硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)、硫酸角質素(keratan sulfate)、硫酸皮膚素(dermatan sulfate)、硫酸類肝素(heparan sulfate)等主要糖胺多糖 4. 本產品檢測范圍為0.2至5微克糖胺多糖 5. 操作時,須戴手套 6. 系統操作時,標準樣品測定只需1次 7. 空白對照讀數通常小于0.06,如果超過表明抽去上清操作不當 8. 孵育時,避免光照 9. 如果樣品糖胺多糖含量過低,可以濃縮樣品或增加樣品量至100微升 10. 樣品濃度可以表述為:微克糖胺多糖/總蛋白等 11. 本公司提供系列糖類代謝檢測試劑產品
質量標準
1. 本產品經鑒定性能穩定 2. 本產品經鑒定檢測敏感
|
||||||||||||||||||||||||
上海哈靈生物科技有限公司 版權所有
網站關鍵詞: ELISA試劑盒,進口ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,ELISA試劑盒代測 管理登陸 ICP備案號:滬ICP備2021006990號-1 |