亚洲欧美一区二区三区九九九,无码专区国产精品视,国产精品视频一区二区三四,久久久精品自慰91一区白浆

技術(shù)文章Article 首 頁 > 技術(shù)文章 > 抗壞血酸含量測定試劑盒操作說明書
抗壞血酸含量測定試劑盒操作說明書
點擊次數(shù):1466 更新時間:2022-08-03
 


注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體120ml×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體6ml×1 4℃保存; 試劑二:液體5ml×1 4℃保存; 試劑三:液體6ml×1 瓶,4℃保存;

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑10mg×1 瓶(避光),4℃保存。(稱取1mg加入10ml提取液,即為100μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品)

試驗中所需的儀器和試劑:

研缽、冰、低溫離心機、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

產(chǎn)品說明:

AsAAsA 是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑AsA 在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用, 也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。

抗壞血酸具有較強還原能力將Fe3+還原成Fe2+,鄰二氮菲與Fe2+會形成紅色螯合物,在534nm處具

有強的吸收法,且吸光值與反應(yīng)液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟:

一、樣品的前處理:

(1) 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 20min,取上清置冰上待測。

(2) 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10個):提取液體積(ul)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);8000g,4℃離心 20min,取上清液置冰上混勻待測。

(3) 血清等液體:按照樣本體積(g):提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1ml 樣本,加入1ml提取液)進(jìn)行混勻。8000g,4℃離心 20min,取上清置冰上待測。

二、測定操作表:

1. 分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 534nm,提取液調(diào)零。

2. 測定前將所有試劑 37℃(哺乳動物) 25℃(其它物種)水浴 5min 以上。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣本測定(按順序加入下列試劑)

 



0μg/ml

15μg/ml

30μg/ml

60μg/ml

80μg/ml

100μg/ml

測定管

標(biāo)準(zhǔn)品(μl

0

6

12

24

32

40

0

樣本(μl

0

0

0

0

0

0

40

提取液(μl

40

34

28

16

8

0

0

試劑一(μl

50

50

50

50

50

50

50

混合、搖勻


試劑二(μl

25

25

25

25

25

25

25

試劑三(μl

50

50

50

50

50

50

50

蒸餾水(μl

50

50

50

50

50

50

50

 

充分混勻,室溫靜置 15min 后,534nm 處測定各管吸光值。如底部有沉淀,離心后再讀數(shù)三、抗壞血酸含量計算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣品A 帶入公式中(x),計算出樣品濃度 yμg/mL1.按蛋白濃度計算

抗壞血酸(μg / mg prot=y×V ÷V ×Cpr 2.按樣本鮮重計算

抗壞血酸(μg /g 鮮重)= y×V ÷(V ÷V 樣總×W) 3.按細(xì)胞數(shù)量計算

抗壞血酸(μg /106cell= y×V ÷(V ÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) 4.按體積計算

抗壞血酸(μg /ml=10y

V 樣總:上清液總體積,mLV 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積;W:樣品質(zhì)量,g Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;細(xì)胞數(shù)量:以 106 為單位計量;T:樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項:

1、樣品處理需勻漿*,抗壞血酸易分解,需避光保存

2、標(biāo)準(zhǔn)品:現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、若不確定樣品中 抗壞血酸 含量的高低,可稀釋幾個梯度后再進(jìn)行測量。

4、因為提取液中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。