抗壞血酸含量測定試劑盒說明書

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

規格：100T/96S

產品內容：

提取液：液體120ml×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體6ml×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體5ml×1 瓶，4℃保存； 試劑三：液體6ml×1 瓶，4℃保存；

標準品：粉劑10mg×1 瓶（避光），4℃保存。（稱取1mg加入10ml提取液，即為100μg/ml標準品）

試驗中所需的儀器和試劑：

研缽、冰、低溫離心機、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調式移液器和蒸餾水。

產品說明：

AsA 。AsA 是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑，AsA 在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用， 也是衡量農作物產品品質的重要指標之一。

抗壞血酸具有較強還原能力將Fe3+還原成Fe2+，鄰二氮菲與Fe2+會形成紅色螯合物，在534nm處具

有強的吸收法，且吸光值與反應液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

(1) 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入1ml提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。

(2) 細菌、真菌：按照細胞數量（10個）：提取液體積（ul）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；8000g，4℃離心 20min，取上清液置冰上混勻待測。

(3) 血清等液體：按照樣本體積（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1ml 樣本，加入1ml提取液）進行混勻。8000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。

二、測定操作表：

1. 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 534nm，提取液調零。

2. 測定前將所有試劑 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上。

3. 標準曲線的繪制及樣本測定（按順序加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置 15min 后，534nm 處測定各管吸光值。如底部有沉淀，離心后再讀數三、抗壞血酸含量計算

根據標準曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計算出樣品濃度 y（μg/mL）。1.按蛋白濃度計算

抗壞血酸（μg / mg prot）=y×V 樣÷（V 樣×Cpr） 2.按樣本鮮重計算

抗壞血酸（μg /g 鮮重）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) 3.按細胞數量計算

抗壞血酸（μg /106cell）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量) 4.按體積計算

抗壞血酸（μg /ml）=10y

V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應體系中上清液體積；W：樣品質量，g ；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；細胞數量：以 106 為單位計量；T：樣本稀釋倍數。

注意事項：

1、樣品處理需勻漿*，抗壞血酸易分解，需避光保存

2、標準品：現配現用。

3、若不確定樣品中 抗壞血酸 含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。

4、因為提取液中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。