亚洲欧美一区二区三区九九九,无码专区国产精品视,国产精品视频一区二区三四,久久久精品自慰91一区白浆

技術文章Article 首 頁 > 技術文章 > 各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒說明書
各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒說明書
點擊次數:1240 更新時間:2021-08-04
 

各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒

規格:200 mL/kit

保存:本產品對光敏感,應該室溫避光儲存,保質期 2 年。無菌開封后,保存于室溫。

試劑盒組成: 

試劑A 200mL

試劑C 100mL

細胞洗滌液 200mL

紅細胞裂解液 100mL

操作步驟: 

1. 取新鮮抗凝全血,血液體積小于5mL時,在離心管中先加入4mL試劑A,后將2mL試劑C小心疊

加于試劑A之上,形成梯度界面(血液體積大于等于5mL,試劑A與試劑C比例2:1,試劑總量與稀

釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之

二,否則會影響分離效果),將血液平鋪到分離液液面上方,

注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,

然后將血液小心的平鋪于分離液上,因為兩者的密度差異,將

形成明顯的分層界面。如果樣品較多,加樣的時間較長,在離

心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。)

2. 室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min(血液的體積

越大所需的離心力越大,離心時間越長,最佳的分離條件需摸

索,離心轉速最大不超過1200g)。

3. 離心后,離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層,上層細

胞為單個核細胞層,下層細胞為中性粒細胞層,如圖所示(個

體差異或者是分離條件不同,粒細胞層可分離不明顯)。

4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性

粒細胞到15mL潔凈的離心管中,10mL PBS或細胞洗滌液洗滌

細胞。250g,離心10min(如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞

裂解液)。

5. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心

10min。

6. 重復步驟6

7. 棄上清,細胞重懸備用。

注意事項: 

A. 開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免

微生物污染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫(18℃~25℃),如室內溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是

分離示意圖

血漿層

單個核細胞層

試劑 C

試劑 A

紅細胞層

中性粒細胞層

 

溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內),為保持淋巴細胞的活性,應避免冷凍和冷藏。

D. 血液樣本不需稀釋,直接進行分離即可。

E. 稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集,

大大降低細胞得率及純度。

F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導致細胞掛壁,影響分離效果。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調節離心轉數和離心時間,摸

索最佳的分離條件。

H. 如果要進一步對分離的細胞進行培養,那在收集血液和分離過程中,注意無菌操作,避免微生

物污染。

I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應提

供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。