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細菌污染種類
點擊次數:1619 更新時間:2020-04-03
 

 

污染向來是在細胞培養中的大問題。預防或治理污染是細胞培養成功的關鍵因素。我們在細胞培養時,在開始階段就要十分重視污染問題,否則會前功盡棄,這樣不僅浪費時間,也會浪費人力、物力。  

(一)  有哪幾類污染?

在細胞培養過程中的污染不只是指微生物,而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質,包括生物和化學物質。   

1、細菌污染

細菌污染是實驗室細胞培養中常見的污染,即使在細胞培養液中加入了抗菌素,也可能因為操作不慎而引起污染。見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見。培養細胞受細菌污染后,會出現培養液變混濁,pH改變。污染后細胞發生病理改變,胞內顆粒增多、增粗,后變圓脫落死亡。   

 

2、真菌污染

真菌污染是細胞培養過程中見的一種,的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培養細胞受真菌污染后,可見培養液中漂浮著白色或淺黃色的小點,有的散在生長,培養液一般不發生混濁;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中,有的呈鏈狀排列。真菌污染后,細胞生長變慢,但后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。

 

3、支原體污染

支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的小微生物,小直徑0.2μm,一般過濾除菌無法去除它,光鏡下難以看清它的形態結構。開始不易發現,能在偏堿條件下生存,對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。  

培養細胞受支原體污染后,部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢,部分細胞變圓,從瓶壁脫落。但多數細胞污染后無明顯變化,或略有變化,若不及時處理,還會產生交叉污染。   

 

4、非同種細胞污染

由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。   細胞培養物所造成的化學成分的污染也偶有發生,大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學物質所致。

 

(二)污染類型的區別

1、細菌、真菌污染的檢測

(1)  肉眼觀察 ---- 細菌、真菌污染常在傳代、換液、加樣等開放性操作之后發生,而且增生迅速,若有污染,在48小時內可明顯觀察到,例如培養液變混濁,或略加振蕩有很多漂浮物漂起。  

(2)  接種觀察 ---- 用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種,也可發現是否有污染。   

(3)  鏡下觀察 ---- 倒置顯微鏡的高倍鏡下可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮,即為細菌污染。細胞之間有絲狀、管狀、樹枝狀或卵形的物質常為真菌污染。   

 

2、支原體污染的檢測

(1)  相差顯微鏡觀察 ---- 接取少許培養液滴在載物片上,再蓋上蓋片觀察,支原體在鏡下呈暗色微小顆粒,多位于細胞與細胞之間,有時可見類似于布朗運動的表現。注意與細胞破碎溢出的內容物如線粒體等相區別。  

(2)  熒光染色法觀察 ---- 熒光染料Hoechst33258,此染料能與DNA特異地結合,可使支原體內的DNA著色,熒光顯微鏡下支原體呈綠色小點,散在于細胞周圍或附于細胞表面。  

(3)  電鏡檢測 ---- 條件許可,可用掃描電鏡或透射電鏡觀察。一般在細胞培養48~72小時,細胞接近匯合前,用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后才能進行觀察。  

(4)  培養檢測 ---- 細胞懸液5mL加入45mL支原體肉湯培養基,培養14天后觀察肉湯培養有無霧狀沉淀,然后取0.5ml加入已冷卻到50℃的培養基中,再用瓊脂培養基做分離培養,37℃培養3天觀察有無“荷包蛋”菌落出現。  

 

3、病毒的檢測

(1)  應用電鏡技術快速診斷動物病毒病  

(2)  逆轉錄_聚合酶鏈反應RT_PCR檢測病毒