超氧化物歧化酶試劑盒 測定意義: SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子 發生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成 酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 測定原理: 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臜,后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深, 說明 SOD 活性愈低,反之活性越高。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水 試劑的組成和配制: 提取液:60mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:15mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時加入27ml蒸餾水,充分搖勻懸濁液; 試劑三:液體 175μL×1 支,4℃保存;(與蒸餾水1:1稀釋后再使用) 試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。 粗酶液提取: 1、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 3、血清(漿)樣品:直接檢測。 |