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細胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒產品說明書

主要用途
磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B）細胞繁殖與毒性定量檢測試劑是一種旨在通過使用蛋白結合性紅色染料，即比色法定量測定細胞內總蛋白質合成率，以評價活體細胞繁殖的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適用于各種藥物、化學、環境因子和營養因子處理的貼壁生長中的動物或人體細胞。替代傳統的同位素[3H]-thymidine檢測的佳選擇。產品嚴格無菌，即到即用，簡捷敏感，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
作為蛋白質染色劑之一的磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B），又稱酸性紅52（Acid Red 52），是一種陰離子染料，與蛋白質靜電（electrostate）結合，在540nm波長下產生吸收峰：吸光值與細胞量成線性正相關。
產品內容
固著液（Reagent A） 毫升
清理液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 毫升
酸性液（Reagent D） 毫升
溶解液（Reagent E） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存在室溫下，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
*細胞培養液：用于懸浮細胞的混勻
15毫升錐形離心管：用于懸浮細胞操作的容器
比色皿：用于細胞染色比色的容器
臺式離心機：用于沉淀細胞
平式搖蕩儀：用于混勻染料
分光光度儀或酶標儀：用于定量檢測染色后的細胞
實驗步驟
一、 貼壁細胞檢測
1． 準備96孔細胞培養板的待測細胞 
2． 到規定的檢測時間點，從細胞培養箱里取出待測的96孔細胞培養板
3． 小心加入50微升預冷的固著液（Reagent A）到含有200微升細胞培養液的96孔板中每一個孔里（注意：每孔中的培養液需200微升）
4． 放進4℃冰箱里，孵育1小時
5． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細胞培養液
6． 小心加入xx微升清理液（Reagent B）
7． 小心抽去清理液
8． 重復實驗步驟6至7二次
9． 小心加入xx微升染色液（Reagent C）
10．室溫下孵育30分鐘，避免光照
11．小心抽去染色液
12．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
13．快速抽去酸性液（注意：參見注意事項8）
14．重復實驗步驟12至13一次（注意：確保培養孔中無任何液體殘留；注意事項6）
15．加入xx微升溶解液（Reagent E）
16．置放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
17．即刻放進酶標儀里測讀：波長540nm，參考波長690nm
18．實際吸光讀數＝OD540－OD600
19．繪制細胞生長曲線：縱座標（Y軸）為實際吸光讀數（A）；橫坐標（X軸）為細胞數或時間點或藥物濃度
二、 懸浮細胞檢測
1． 準備待測的懸浮細胞
2． 到規定的檢測時間點，轉移到15毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
4． 小心抽去上清液
5． 加入200微升用戶自備的*細胞培養液
6． 小心加入50微升預冷的固著液（Reagent A），混勻
7． 放進4℃冰箱里，孵育1小時
8． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
9． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細胞培養液
10．小心加入xx微升清理液（Reagent B），混勻
11．放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
12．小心抽去清理液
13．重復實驗步驟10至12二次
14．小心加入xx微升染色液（Reagent C），混勻
15．室溫下孵育30分鐘，避免光照
16．放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
17．小心抽去染色液
18．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
19．放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
20．小心抽去酸性液
21．重復實驗步驟18至20一次（注意：確保無任何液體殘留） 2
22．加入xx微升溶解液（Reagent E），混勻
23．平放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
24．即刻轉移到比色皿
25．放進分光光度儀儀里測讀：波長540nm，參考波長690nm
26．實際吸光讀數＝OD540－OD600
27．繪制細胞生長曲線：縱座標（Y軸）為實際吸光讀數（A）；橫坐標（X軸）為細胞數或時間點或藥物濃度
注意事項
1． 本產品為100次操作
2． 操作時須戴手套
3． 整個操作須無菌操作
4． 如果染色液（Reagent C）出現沉淀，建議過濾后，再使用
5． 建議檢測96孔板里的細胞量小于106
6． 建議使用有培養液但無細胞作為背景空對照：樣品讀數－背景空對照讀數
7． 每孔中的培養液需200微升，注意周邊培養孔的液體蒸發
8． 孵育時，須避光
9． 使用酸性液（Reagent D），需快速進行，以免染料漏出胞外
10．細胞濃度過高，可以使用波長490至530nm
11．如果用戶沒有匹配的波長，可以使用波長490nm至560nm之間的任一波長替代
12．本公司提供系列細胞繁殖檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定顯色清晰